兽医微生物主要内容
细菌：
大小与形态
大小
- 细菌大小：微米级别 10－6
- 病毒大小：纳米级别 10－9
形态
球菌、杆菌、螺旋菌
菌落：
菌苔：
细胞壁
细胞膜
细胞质
核糖体
质粒
核体：裸露的双链DNA堆积而成，无核膜核仁，又称拟核
荚膜
鞭毛
菌毛
性菌毛：由F质粒编码
芽孢
| G+ 革兰氏阳性菌 | G- 革兰氏阴性菌 | |
| 特有结构 | \(\left.\begin{array}{r}壁\\脂\end{array}\right\}\)磷壁酸 |
磷脂 外膜蛋白 脂多糖 LPS |
| 细胞壁厚度 | 15-80nm | 10-15nm |
| 肽聚糖 | 40％~95% | 10%~20% |
| 脂类 | 1%~4% | 11%~22% |
| 青霉素敏感性 | 敏感 | 不敏感 |
细菌L型： 多呈G－，高渗培养基上培养形成煎蛋样菌落
原生质体
原生质球
溶菌酶：胞壁质酶，裂解肽聚糖，一种低分子不耐热的碱性蛋白。
细菌染色方法
革兰氏染色法
原理为细胞壁肽聚糖厚度
结晶紫初染\(\ce{->}\)碘液媒染\(\ce{->}\)酒精脱色 \(\ce{->}\)沙黄复染
瑞氏染色
巴氏杆菌属：呈蓝色、两极浓染
特殊染色法
① 抗酸染色
- 一般对细胞壁有丰富蜡质的细菌染红色，如结合分枝杆菌
② 柯兹罗夫染色
- 布氏杆菌染红色
③ 菌毛 鞭毛 荚膜4染色
细菌生长繁殖
- 繁殖方式：二分裂
- 生长曲线
- 迟缓期：代谢活跃，合成积累酶，RNA含量增加，细菌数不增加
- 对数期：致病力强，形态、染色特性、生理活性比较典型，抗菌药敏感性强，快速增殖
- 稳定期：新生菌与死菌数大致平衡，营养消耗、代谢物积累、抗生素产生
- 衰亡期：死菌数超过活菌数，菌体变性或自溶，染色不典型难以鉴定，最终可能全部死亡
细菌代谢
- 抗生素
- 细菌素：某一类细菌代谢过程中产生的对同种近缘菌株有抑菌活性的多肽或者前体多肽
- 卵磷脂酶：一些细菌产生毒素的主要成分。如产气荚膜梭菌
- 透明质酸酶：是一种侵袭性酶，可以降低透明质酸活性，提高组织中液体渗透能力，协助细菌扩散。
- 细菌色素\(\left\{\begin{array}{l}水溶性色素：能弥散至周围组织，如绿脓杆菌\\脂溶性色素：不溶于水，仅保持在菌落内，如金黄色葡萄球菌\end{array}\right.\)
人工培养
\(\left\{\begin{array}{l}基础培养基\\营养培养基\end{array}\right.\)
\(\left\{\begin{array}{l}选择培养基\\鉴别培养基\\厌氧培养基\end{array}\right.\)
\(\left\{\begin{array}{l}液体培养基：浑浊、沉淀(炭疽)、菌膜(分枝杆菌)\\半固体培养基：0.5\%琼脂，做穿刺试验，检测运动性(有无鞭毛)\\固体培养基：1.5\%琼脂，观察菌落形态\end{array}\right.\)
| 特性 | 内毒素 | 外毒素 |
| 化学性质 | 脂多糖(类脂A) | 蛋白质 |
| 产生 | G-菌体裂解产生 | 某些G+/G-分泌 |
| 耐热性 | 极耐热 | 不耐热 |
| 毒性作用 | 全身性：发热、腹泻、呕吐 | 特异性：细胞毒素、肠毒素、神经毒素，对特定细胞或组织发挥特定作用 |
| 毒性程度 | 弱，很少致死 | 强，往往致死 |
| 致热性 | 常致热 | 不制热 |
| 免疫原性 | 较弱，免疫应答不足以中和毒性 | 强，刺激机体产生中和抗体(抗毒素) |
| 能否产生类毒素 | 不能 | 能，用甲醛处理 |
类毒素：
科赫法则：(病原学说)
- 病原微生物存在于所有发病动物体内，但健康动物体内没有。
- 可从发病动物体内分离培养并纯化得到病原。
- 用分离培养的病原接种健康动物并能使之患上同样的疾病。
- 从患病实验动物体内能再次分离得到相同的病原。
分离鉴定
常规检测
①形态与结构
②分离培养
③生化试验
- 氧化发酵
- 氧化酶试验
- VP试验
- 甲基化试验
- 吲哚试验
- 硫化氢试验等
- 等
④药物敏感试验
血清学检测
抗体/抗原检测
- 凝集试验
- 沉淀试验
- 补体结合试验
- 抗体标记技术
- 中和试验等
- 等
基因检测
- 聚合酶链式反应PCR
- 核酸杂交技术
消毒灭菌
①物理灭菌法
\(\left\{\begin{array}{l}干热灭菌\left\{\begin{array}{l}火焰灭菌法：火焰直接烧灼，如接种环\\热空气灭菌法：160℃维持2小时\end{array}\right.\\湿热灭菌\left\{\begin{array}{l}煮沸灭菌：如饮水\\巴氏消毒：低温杀灭液态食品中的病原菌\left\{\begin{array}{l}低温维持：63-65℃\ \ 保持30分钟\\高温瞬时：71-72℃ \ \ 15秒\\超高温：132℃ \ \ 1-2秒\end{array}\right.\\流通蒸汽灭菌\\瞬间灭菌(反复多次流通蒸汽)\\高压蒸汽灭菌：121.3°C维持15－30分钟\end{array}\right.\\辐射消毒\left\{\begin{array}{l}非电离辐射\left\{\begin{array}{l}可见光、日光\\紫外线253.7nm\end{array}\right.\\电离辐射：\alpha 、\beta、 \gamma、 \chi以及高能质子中子等\end{array}\right.\\过滤除菌：不能过滤没有细胞壁的细菌(如病毒、支原体、细菌L型)，主要用于不耐高温的营养液、血清、抗菌素等。滤膜孔径为0.45\mu m或0.22\mu m\end{array}\right.\)②化学消毒剂
- NaOH(火碱烧碱苛性钠)：1－2％有腐蚀性用于畜舍、地面和用具
- 石灰乳：生石灰CaO加一倍水成熟石灰CaOH再配成10-20%悬浊液，用于粉刷墙壁、围栏、消毒地面、沟渠、尿粪等
- 漂白粉：主要成分是次氯酸钙，有效氯成分30-38%，用于畜舍、地面、水沟、粪便、运输车船、水井等
- 过氧乙酸(过醋酸)：0.2-0.3%喷雾消毒，强氧化剂可带畜消毒
- 乙醇：70-75%常与碘酊合用作皮肤消毒，对芽孢及病毒无效
- 硫柳汞：硫汞柳酸钠，作防腐剂
- 来苏尔：3-5%消毒畜舍、用具、衣物、日常器械以及洗手等，对芽孢和结核杆菌作用小。
- 新洁尔灭：季胺盐类阳离子表面活性剂，好，应避免与肥皂或碱类接触
- 福尔马林：2-4%喷洒消毒，1%体表消毒，熏蒸消毒。对皮肤、黏膜刺激强烈。
- 二氯异氰尿酸钠
- 二氯海因、溴氯海因、二溴海因
- 农乐、农福云云
生物热消毒：粪便、垃圾无害处理，堆沤发酵产热可达70°C
各论
| G－ 革兰氏阴性 | G＋ 革兰氏阳性 |
| 大肠杆菌 | 丹毒丝菌 |
| 沙门氏菌 | 李氏杆菌 |
| 布鲁氏菌 | 炭疽杆菌 |
| 巴氏杆菌 | 结核杆菌 |
| 里氏杆菌 | 产气荚膜梭菌 |
| 嗜血杆菌 | 破伤风梭菌 |
| 放线杆菌 | 葡萄球菌 |
| 鼻疽杆菌 | 猪链球菌 |
| 波氏杆菌 | 肺炎链球菌 |
| 螺旋体 | 蜂房球菌 |
球菌
猪链球菌
- 形态：链状，35种血清型中2型最强。
- 培养：血琼脂上培养形成灰白色、表面光滑、边缘整齐，有溶血环。直径约0.5-0.75mm
- 病变：猪脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜炎、浆膜炎、流产和局部脓肿。
- 诊断：
蜂房球菌
- 培养特性：厌氧，最适温度34°C
- 引起欧洲幼虫腐臭病
肠杆菌
G- 无芽孢 无荚膜
| 大肠埃氏菌 | 沙门氏菌 | |
| 病原特性 |
麦康凯上形成红色菌落 伊红美蓝上黑色带金属光泽的菌落 三糖铁上分解葡糖产酸产气，多数分解乳糖不产H2S SS培养基抑制G＋和和多数大肠菌群和变形杆菌 |
麦康凯上无色透明的小菌落 三糖铁上能分解葡糖，不分解乳糖，多数产H2S产气 SS培养基正常生长 |
| 流行症状 | 消化道传染(幼畜致病) | 消化道感染(青、幼动物) |
| 病理特征 | 仔猪黄痢、白痢，仔猪水肿病，肠道外感染(腹膜炎等) |
鸡：鸡白痢、鸡伤寒、鸡副伤寒 猪：猪副伤寒 |
巴氏杆菌属
①巴氏杆菌
多杀巴氏杆菌病(牛败、猪肺、禽霍乱，还要慢性萎鼻炎)
②里氏杆菌
鸭疫里氏杆菌病(心肝气囊雏三炎)
| 巴氏杆菌 | 里氏杆菌 | |
| 病原特征 |
球杆状或短杆状，两端钝圆 瑞氏或美蓝染色两极着色 血平板长成水滴样小菌落 |
菌体成杆状或椭圆形 瑞氏染色两极着色 |
|
流行症状 病理诊断 |
急性呈出血性败血症，迅速死亡 如牛出血性败血症、猪肺疫、禽霍乱、兔巴氏杆菌病等 慢性则呈萎缩性鼻炎(猪、羊)、关节炎及局部化脓性炎症 |
初鸭传染性浆膜炎 |
③放线杆菌
猪传染性胸膜肺炎
④嗜血杆菌
副猪嗜血杆菌病
| 放线杆菌 | 嗜血杆菌 | |
| 病原特征 |
新鲜病料两极染色 需添加V因子(NAD) 巧克力平板或添加NAD的TSA平板 稳定产生β溶血，黄金色葡萄球菌增强溶血圈 CAMP阳性 |
美蓝两极染色 需要X因子和V因子 巧克力平板或添加NAD的TSA平板
|
|
流行症状 病理诊断 |
猪是专一宿主 可引起猪的传染性胸膜肺炎 |
与金葡菌呈现卫星现象 |
G- 需氧杆菌
①布鲁氏菌
| 病原特征 |
球杆状，无鞭毛无芽孢。G－胞内寄生，专性需氧 赤藓糖醇刺激生长，柯兹罗夫染红色。 |
| 流行特点 | 经皮肤和结膜、消化道、呼吸道等黏膜感染 |
| 病理特点 |
侵害生殖系统，不定期热(波浪热)、关节炎 睾丸炎、附睾炎、乳腺炎、子宫炎等，孕期敏感易流产 |
| 诊断 | 病原学、血清学、免疫学(布氏杆菌水解素注射过敏) |
②鼻疽伯氏菌
马、驴、骡单蹄兽的病原，也感染人。
G－ 专性需氧
马属动物、人：鼻疽结节或溃疡
雄性豚鼠：睾丸炎 称 施特劳斯反应
诊断：微生物学、变态反应(鼻疽菌素点眼或皮肤法)
③支气管败血波氏菌
G- 麦康凯蓝灰色菌落，伴红色环，培养基着琥珀色
感染哺乳动物，猪传染性萎缩性鼻炎
诊断：细菌学、血清学
G+ 无芽孢 杆菌
产单核细胞李氏杆菌
产单核，排排坐、蓝绿光、转圈病
G＋ 无芽孢 胞内寄生 4°C可生长 V型成对排列
葡糖琼脂培养呈蓝绿色，半固体呈云雾状生长，有运动性
病理特点：神经性症状“转圈病”
G+ 产芽孢杆菌
①炭疽芽孢杆菌
| 病原特点 |
菌体平直，竹节状 穿刺培养，倒松树状 菌落边缘卷发样 串珠反应(青霉素) 液体培养絮状沉淀 |
|
症状 病理诊断 |
症状：七窍流血 诊断： ①Ascoli沉淀反应 ②间接血凝试验 ③协同凝集试验 ④串珠荧光抗体检查 ⑤琼脂扩散试验 |
②产气荚膜梭菌
旧名魏氏梭菌，圆屋顶样，双层溶血环，爆裂发酵，无关节长丝状。
③破伤风梭菌
厌氧 神经毒素(外毒素) 全身肌肉强直呈木马样
分枝杆菌
| 结核牛分枝杆菌 | 副结合分枝杆菌 | |
| 病原特点 |
G+，细胞壁有蜡质/糖质，抗酸染色红色 罗杰二氏培养基生长，生长缓慢 菌落粗糙，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米黄色 免疫佐剂(卡介苗) |
|
| 症状 | 胞内寄生。引起牛结核病，病灶干酪样坏死，珍珠壁 | 胞内寄生，间歇性腹泻，增生性肠炎 |
| 诊断 | 变态反应 |
螺旋体
①猪痢疾螺旋体
严格厌氧，介于细菌和原虫的微生物
引起猪痢疾(血痢、黑痢)
诊断：镜检
②钩端螺旋体
钩状，需氧或微需氧，科氏培养基培养
常引起钩端螺旋体病(人畜共患)
诊断：血液尿液镜检
支原体
无细胞壁，能透过细菌过滤器
二分裂或芽生繁殖，抗青霉素
致病性：禽慢呼、猪气喘、牛肺疫
真菌
①白僵菌
附录
| 麦康凯 | 大肠杆菌 | 红色 |
| 沙门氏菌 | 无色 | |
| 波氏杆菌 | 蓝灰色 | |
| 三糖铁TSI | 大肠杆菌 | 黄色，不产H2S |
| 沙门氏菌 | 黑色，产H2S | |
| SS | 鉴别沙门氏菌 | |
| 血液琼脂 | 猪链球菌、巴氏杆菌、里氏杆菌、产气荚膜梭菌（双层溶血环） | |
|
巧克力平板或 添加NAD血平板 |
放线杆菌、嗜血杆菌 | |
| 葡糖琼脂平板 | 李氏杆菌（蓝绿/黑绿荧光） | |
| 罗杰二氏平板 | 分枝杆菌 |
G+/-比较
病毒：
一、概念
二、结构
干扰素敏感
痘病毒最大 300nm 圆环病毒最小 17nm
\(\begin{cases} 核衣壳 \begin{cases} 心髓 ->基因组（DNA/RNA、单股/双股、分段/不分段） \\ 衣壳-> 壳粒->多肽\end{cases} \\ 囊膜：有纤突 \end{cases}\)
- 核酸（只有一种）单双股、分段
- 蛋白 结构蛋白构成衣壳、非结构蛋白：酶、3ABC抗体
- 脂质、糖类 囊膜病毒囊膜内
三、增殖培养与鉴定
- 细胞
- 鸡胚
- 动物
细胞培养：
细胞类型：原代细胞、传代细胞
病毒感染后产生的细胞病变、包涵体及空斑
细胞病变CPE：病毒感染导致细胞损伤，作用：计算测定病毒感染力，半数感染量TCID50
空斑试验：病毒在细胞内复制后产生空斑，作用：纯化病毒、定量PFU、测定血清效价、测定干扰素活性
包涵体：某些病毒侵染细胞后的特征性形态变化，固定染色后可通过光学显微镜观察
狂犬病侵染神经细胞，产生内基氏小体
疱疹病毒：猫头鹰眼
病料采集与准备：
采集器官或组织样本、分泌物或渗出液
病毒分离和鉴定：
- 分离培养
- 病毒形态学鉴定：电镜
- 血清学鉴定：中和试验、血凝抑制试验、免疫组化、免疫转印、免疫荧光ELISA等
- 分子生物学鉴定：PCR
四、病毒分类
\[病毒分类\begin{cases} DNA\begin{cases} 单股\begin{cases} 痘病毒科\\疱疹病毒科\\非洲猪瘟病毒科\\腺病毒科 \end{cases}\\双股\begin{cases} 细小病毒科\\圆环病毒科 \end{cases} \end{cases}\\RNA\begin{cases}双股\begin{cases} 呼肠孤病毒科\\蓝舌病\\法氏囊 \end{cases}\\ 单正\begin{cases} 冠状病毒科\\动脉炎病毒科\\微RNA病毒科\\嵌杯病毒科\\黄病毒科 \end{cases}\\单负 \begin{cases} 正粘病毒科\\副粘病毒科\\弹状病毒科 \end{cases}\end{cases}\\反转录\begin{cases} 血癌/禽白血病\\马传贫 \end{cases}\\朊病毒\\噬菌体 \end{cases}\]口诀：
双D豆包甜非咸，单股细小和圆环；
双R蓝舌加法囊，单负双黏及子弹；
单正冠状动脉炎，微量黄酒杯莫贪；
反转血癌马传贫；以上分类要记全。
囊膜病毒：
- 副粘病毒科（新城疫、小反刍疫、犬瘟）
- 正粘病毒科（禽流感）
- 痘病毒科
- 疱疹病毒科（伪狂犬、牛传染性鼻气管炎、马立克、禽传染性喉气管炎、鸭瘟）
- 反转录病毒科（禽白血病、马传染性贫血病毒）
- 弹状病毒科(狂犬病、牛流行热（三日热）)
- 黄病毒科（猪瘟、牛病毒性腹泻、已型脑炎、坦布苏病毒）
- 冠状病毒科（禽传染性支气管炎、猪传染性肠胃炎、猪流行性腹泻）
- 动脉炎病毒科（蓝而病）
- 非洲猪瘟病毒科（非洲猪瘟）
口诀：
囊膜病毒成员多，双黏痘疱和反弹，另加黄冠动脉炎；
副黏新刍和犬瘟。正黏只有禽流感；
疱疹是个大家族，伪鼻马喉和鸭瘟；
反转血癌马传贫，狂犬三日子弹穿；
猪瘟牛泻乙脑黄，禽支猪胃都为冠；
动脉炎病有蓝耳，非洲猪瘟是病毒。
血凝病毒：
副黏病毒科（新城疫、小反刍疫、犬瘟）
正黏病毒科（禽流感）
细小病毒科（猪细小、犬细小）
呼肠孤病毒科（蓝舌病）
嵌杯病毒科（兔出血症病毒）
腺病毒（犬传染性肝炎病毒、减蛋综合征病毒）
乙型脑炎病毒
口诀：
血凝家族成员少，双黏细小杯腺，再加一个乙脑炎
孤树一直为蓝舌，兔死狗烹莫杯沉，蓝眼减蛋血凝现。
双股DNA病毒：
- 痘病毒科：砖形 300nm大病毒、哑铃样髓心
- 疱疹病毒科：有囊膜、嗜酸性包涵体、潜伏在神经细胞
- 非洲猪瘟病毒：DNA虫媒病毒、由蜱虫传播
- 腺病毒：球状、无囊膜、衣壳20面对称体
单股DNA病毒：
- 细小病毒科：除鹅细小和阿留申外都有血凝性，但无血凝素纤突、唯二貂病（貂肠炎病毒、貂阿留申病毒）
- 圆环病毒科：已知最小病毒17nm、PCV-1、PCV-2、PCV-2三个血清型
反转录病毒：具有反转录酶
- 禽白血病病毒
- 马传染性贫血病毒
- 山羊关节炎-脑炎
- 猫免疫缺陷疾病（猫艾滋）
双RNA病毒
呼肠孤病毒科：
- 蓝舌病毒：羊蓝舌病 由库蠓传播
- 轮状病毒引起腹泻、呈车轮状
- 草鱼出血症病毒
双RNA病毒科：
- 传染性法氏囊病病毒
- 传染性胰坏死病毒
单负股RNA病毒 18’
不分节段：
- 副黏病毒科：血凝性（血凝素神经氨酸酶HN、融合蛋白F）多核细胞/合胞体
- 弹状病毒科：子弹状、核衣壳螺旋对称。狂犬病毒有内基小体、牛暂时热病毒牛流行热/牛三日
分节段：
- 正黏病毒科：禽流感病毒。血凝素H和神经氨酸酶N，易变异。H5和H7亚型毒力强。潜伏期21天。诊断：检测病毒：分离→HA→HI→毒力测定、高致病性标准：10倍稀释尿囊液接种4-6周龄8只易感鸡0.2ml,1-5只为H5/H7,6-8只为HPAI
单正股RNA病毒
套式病毒目：
- 冠状病毒科：有囊膜、呈皇冠状。禽传染性支气管炎病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、2019-nCoV、SARS-CoV。
- 动脉炎病毒科：猪蓝耳病（猪呼吸与繁殖综合征病毒PRRSV）
其他正股RNA病毒：
- 微RNA病毒科：口蹄疫对酸敏感FMDV偶蹄兽易感（马除外）
- 嵌杯病毒科：杯状凹陷。兔出血症病毒RHDV引起兔出血性败血症俗称兔瘟
- 黄病毒科：球形有囊膜。猪瘟病毒、牛病毒性腹泻病毒、乙型脑炎、鸭坦布苏病毒
朊病毒Prion 2‘
具有传染性的蛋白，无核酸
特性：导致退化性脑组织病理学反应；无炎症、干扰素、无免疫原性
本质：正常朊病毒蛋白PrPc →PrPSC
病理变化：海绵状脑病。脑组织空泡，淀粉样斑块，神经胶质细胞增生
人：库鲁病、克雅病、新型克雅氏病等
动物：牛海绵脑病（疯牛病）羊搔痒症、水貂脑病、猫脑病等
噬菌体
可感染细菌，引起宿主细菌裂解。属于尾病毒科