一、样品处理方法
处理方法：
- 概述
- 提取方法
- 净化方法
- 浓缩方法
概述
1、目的：将待测组分从样品基质中分离出来，并达到分析仪器能够检测的状态。
2、作用：
(1)将药物从样品中释放出来。
(2)除去样品中的干扰杂质
(3)达到可检测的浓度范围。
3、内容：
提取、净化、浓缩和衍生化。
样品采集、制备和贮存
1、样品采集：
(1)遵循代表性原则，进行随机采样。
(2)肌肉、脂肪、肝、肾、皮肤、血液蛋、奶及其加工食品。
(3)活体检测：血浆、尿液和粪便。
(4)屠宰现场：某种药物的靶组织。一股5分取一完整的解剖部位。
2、样品贮存：一般为玻璃或塑料容器，分批封存。
3、样品制备：
采样后至化学分析前试样的准备工作，包括：样品匀化、缩分、过筛、离心过滤、防腐和抑制降解等过程。
提取方法
一、样品类型、待测物与提取溶剂：
1、样品类型：高水分，高蛋白，高脂肪和高糖样品.尿液、血浆、胆汁、奶、蛋、组织。
2、待测物性质：溶解性，稳定性
3、提取溶剂：极性（溶解性能），纯度，沸点，毒性，价格。
- 提取溶剂的选择：相似相溶原则是指组成和/或结构的相似性，分子的极性是常用性质之一。
常用溶剂：
(1)高极性溶剂（最常用）：水，甲醇，乙腈，丙酮
(2)中等极性溶剂：氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯
(3)非极性溶剂：正己烷，石油迷
(4)混合溶剂：乙睛-水等
提取方法：
1、组织捣碎法：
“样品+溶剂”高速(>10000转/min)捣碎2-3min，过滤或离心，将残渣重复提取1-3次，合并滤液或上清液.
2、震荡提取法：
“样品匀浆物+溶剂”中速振荡30-60min,过滤或离心，将残渣重复提取1-3次，合并滤液或上清液.
净化方法
液液分配法
固相萃取法
基质固相分散技术
免疫亲和色谱
分子印迹技术
其他技术
液-液分配(LLE):
利用待测物与样品干扰杂质在互不相溶的两相中的溶解性的差异进行分离净化的方法
固相萃取(SPE)
1、SPE柱：柱体，固定相，滤板
2、填料：硅胶，氧化铝、石墨烯C18,C8,苯磺酸基
3、操作步骤：平衡，上样，洗涤，洗脱。
基质固相分散技术(MSPD)
1、基本操作：2gC18加上0.5g样品，混合研磨月均质的半固态（约30s),装柱，洗涤，洗浓缩，进样。
2、MSPD填料：一般为C18或C8等反相填料，孔径60A,粒度49μm,样品与填料的比例通常为1：4(0.5g组织：2g填料)。
3、解释：机械剪切力，去垢剂功能，样品在巨大表面积(1000m2/2g)上均匀分布。
4、特点：速度快(30min内完成)，直接处理样品样品匀浆、提取和净化在同一过程中完成。
免疫亲和色谱(IAC)
- 以抗原抗体结合反应原理为基础。
- 使用连接有抗体的惰性基质作固定相.
(一)、原理
·1、LAC的建立过程
半抗原合成，人工抗原合成，抗体制备，免疫吸附剂制备，IAC条件建立（吸附、洗涤、洗脱和再生)。
分子印迹技术(MIP)
- MIP是以待测物作为模板分子，利用高分子合成手段制备的、能选择性吸附待测物的功能高分子材料，又称“塑料抗体”。
- 与抗体相比，MIPs兼具免疫吸附剂的高度选择性和理化稳定性。
- 制备简便省时，易于实现工业化生产。
1、MPs的制备原理：
- 在适当介质中，模板分子（印迹分子，待测物)与一定数目的功能单体发生某种相互作用，排列形成分子聚集体。
- 加入交联剂，通过本体聚合反应将单体分子交联固定，提取除去模板分子。
- 带有特定“记忆”功能的MIP能选择性地结合待测物，可做为亲和吸附剂用于残留样品的净化与富集。
2、制备过程
- 所需试剂：印迹分子，功能单体分子，交联剂，引发剂，溶剂
- 常用的功能单体和交联剂：甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯
- 引发剂：
偶氮二异丁氰(AIBN)
浓缩方法
一、旋转蒸发器浓缩
二、气流吹蒸法
色谱分析法
概述
- 体系：被分离组分、固定相、流动相
- 原理：根据不同组分在两相之间分配系数的差异，当两相相对运动时，组分进行重分配
- 经典色谱仪：色谱柱、泵、控温器、检测器、进样器、数据处理系统
- 现代色谱技术特点：分离效能高，分析速度快，检测灵敏度高，选择性高，适用范围广
- 基本概念：色谱峰，保留时间，分离度
- 定性方法：保留值定性法，MS定性
- 定量方法：外标法（标准曲线），内标法
气相色谱法GC
特点：
- 气体做流动相，柱中阻力小，组分传质快，有利于高效，快速分离。
- 灵敏度高，选择性强
- 适用于极性弱，热稳定，沸点低的物质
- 多数药品及其代谢物极性高，热稳定性差，必须经过衍生化才能用GC检测
高效液相色谱法
基本原理：
- 以液体做流动相，固体做分离相的分离分析技术
- 特点
- 高压：150-300kg/min
- 高速：1-10ml/min
- 高效：新型细粒固定相，提高了分离效率
- 高灵敏度：紫外，荧光等检测器，可达1x10-9g
- 高度自动化
联用技术
分离技术与定性技术联用，色谱质谱联用
GC-MS
LC-MS